中图分类：S852.7

学科分类：230.30

成果类别：基础理论

成果水平：未评价

研究起止时间：2015-01～2016-12

评价形式：验收

本项目以小鼠和猫为模型,建立并优化IGRA方法。利用生物信息学及免疫学相结合的方法对弓形虫针对猫或小鼠T细胞弓形虫特异性肽段进行设计并用IGRA方法进行筛选。以弓形虫人工或自然感染实验动物为研究对象,将建立成功的IGRA方法与传统检测体液方法的三个主要指标进行比较：检出时间、特异性、敏感性,从而为弓形虫感染的诊断提供一种新方法。 本项目确定了IGRA各项最优条件,筛选出3条针对猫或小鼠T细胞弓形虫特异性肽段。找出IGRA方法最早检出时间、特异性、敏感性。提交国家专利申请一项,发表研究论文4篇。 本研究首次将IGRA方法应用于动物弓形虫病的诊断,该方法具有敏感性高、特异性强的优点,尤其适用于弓形虫早期感染的检测,预期将会成为新一代的弓形虫检测新方法。通过对弓形虫早期感染的诊断与结合药物加以治疗,防止卵囊传播及弓形虫病的暴发,为防控弓形虫病提供新的手段。该方法的建立会提升我国相关产业在国际上的竞争力,并将获得较大经济效益。 本项目首先对IGRA方法的各项反应条件进行优化,确定抗原刺激细胞的最佳时间,最佳抗原及阳性刺激物浓度,成功将IGRA 方法应用于小鼠及猫感染弓形虫后的诊断。然后,通过筛选确定了针对小鼠的3个免疫特异性多肽,分别来自弓形虫致密颗粒蛋白GRA4和GRA6,棒状体蛋白ROP7。其氨基酸序列分别是SPMNGGYYM,HPGSVNEFDF, IPAAAGRFF,用于小鼠CD8+T 细胞的刺激。 最后,通过将IGRA方法与real-time PCR和ELISA等传统检测方法进行比较,确定了IGRA方法最早检出时间为第4天,IGRA方法的特异性和敏感性均优于传统检测方法。